Действие первое
Зал в Виндзорском дворце. Группа придворных проходит, беседуя вполголоса: они и жалеют Анну, жену Генриха, и насмехаются над ней, ведь король перенес свою любовь на другую. Входит Анна и просит музыканта Сметона повеселить двор до прихода короля. Сметон поет романс и пробуждает в Анне забытое чувство первой любви («Come, innocente giovane»; «В невинной юности»).
Фрейлина Джейн Сеймур, оставшись одна после ухода Анны, которая не дождалась короля, выражает волнение и замешательство: быть может, несчастная знает, что муж хочет покинуть ее? К Джейн присоединяется король, который уверяет ее, что пора перестать скрывать их любовь. Джейн протестует (дуэт «Anna pure amor m'offria»; «Анна свою мне любовь подарила»). Но король убеждает ее, что Анна не достойна сожалений, так как запятнала себя изменой (дуэт «Ah! qual sia cercar non oso»; «Ах, какова она, не дерзаю узнать»).
Парк Виндзорского замка. Вернувшийся из изгнания Перси встречает брата Анны Рошфора. Генрих назначил Перси встречу на охоте, и тот надеется, что с ним будет и жена («Del primier felice amore»; «Первой счастливой любви»). Генрих, собираясь на охоту, приветствует Перси и сообщает ему, что своим возвращением он обязан Анне. Лорд не может сдержать волнения и восторга при виде королевы (ансамбль «Iо sentii sulla mia mano»; «Я ощутил на руке»).
В замке близ комнат Анны Сметон рассматривает ее медальон, который носит на груди: в сердце он тайно хранит нежное чувство к госпоже («Ah! parea che per incanto»; «Ах, как будто чары»). Сметон становится незримым свидетелем встречи Анны и Перси. Перси не хочет отказаться от своей любви, тем более что Генрих забыл королеву. Вынув шпагу, он грозит убить себя, если Анна откажет ему в последней встрече. Увидев его обнаженную шпагу, Сметон выходит из укрытия и вступает с ним в бой. Анна испугана; услышав чьи-то шаги, она теряет сознание. Входит король и, увидев скрещенные шпаги, громко зовет придворных, стражу и во всеуслышание бросает Анне ужасное обвинение в измене. Сметон взывает к справедливости, он готов подтвердить невиновность королевы. С его груди падает медальон с ее изображением. Анна приходит в себя и понимает, что над ее головой и головой безвинного Сметона собралась буря: какое еще нужно доказательство адюльтера, если он носил на груди ее портрет? Анна молит мужа о пощаде, но он непоколебим. Перси считает, что Сметон действительно его соперник, Сеймур еще больше жалеет Анну, Сметон и Рошфор предпочитают смерть такому позору (секстет «In quegli sguardi impresso»; «Прочти в моих глазах»). Генрих велит арестовать Сметона, Перси, Рошфора и Анну (ансамбль «Ah! segnata e la mia sorte»; «Ах, судьба моя решена»).
Действие второе
К Анне, находящейся в заключении, приходит Джейн Сеймур, советуя ей признаться в адюльтере и, запятнав свою честь, тем купить жизнь — таков совет самого короля. Королева, еще не зная, кто ее соперница, обрушивает на фрейлину свой гнев. Сеймур признается, что она и есть ее соперница. Анна, с презрением отшатнувшись от нее, в конце концов понимает, что это новая жертва Генриха и прощает ее (дуэт «Va', infelice, е teso reca»; «Ступай, несчастная, и подумай»).
Из зала, где заседают судьи, выходит сэр Герви с последними новостями: Сметон подтвердил вину Анны, надеясь спасти ей жизнь. Генрих спешит уйти, так как стража ведет в зал суда Анну и Перси. Но Анна останавливает мужа и с достоинством просит убить ее, не выставляя на позорное судилище. Генрих осыпает ее упреками. Перси, желая защитить Анну, заявляет, что Анна принадлежит ему, потому что они с детства любили друг друга. Анна горько сожалеет, что связала свою жизнь с коварным Генрихом (терцет «Fin dall'eta piu tenera»; «С юных лет»). Король велит отвести их в зал суда. Джейн умоляет Генриха сохранить Анне жизнь, но ее просьба отвергнута. Брак короля расторгнут, Анна и ее сообщники должны быть казнены.
Перси встречает в тюрьме Рошфора, осужденного на смерть только потому, что он брат Анны. Входит Герви и объявляет им о помиловании. Но Перси и Рошфор предпочитают умереть.
В тюрьме, куда заключена Анна, слышен плач служанок, королева в бреду, сердце разрывается от жалости к ней. Входит Анна, как будто погруженная в глубокую задумчивость; она вспоминает свою свадьбу, затем счастливое детство и любовь к Перси (с хором «Piangete voi?.. А1 dolce guidami»; «Вы плачете?.. К счастью веди меня»). Осужденные встречаются, Сметон винит себя за то, что послужил невольным виновником смерти королевы. Издалека доносятся пушечные выстрелы и звон колоколов: во дворце встречают новую королеву. Анна приходит в себя. В ярости она проклинает королевскую чету и идет навстречу казни.
